GB 5009.231-2016 水產(chǎn)品中揮發(fā)酚殘留量的測定

中華人民共和國國家標準

GB 5009.231-2016

食品安全國家標準

水產(chǎn)品中揮發(fā)酚殘留量的測定

前 言

  本標準代替SC/T 3031-2006《水產(chǎn)品中揮發(fā)酚殘留量的測定 分光光度法》。

  本標準與SC/T 3031-2006相比，主要變化如下：

  ——將處理方法中的攪拌改為恒溫磁力攪拌；

  ——增加水蒸氣蒸餾儀為處理方法中的提取裝置。

1 范圍

  本標準規定了水產(chǎn)品中揮發(fā)酚殘留量的分光光度測定方法。

  本標準適用于水產(chǎn)品中可食部分揮發(fā)酚殘留量的測定。

2 原理

  用堿性溶液破壞樣品組織結構，在酸性條件下用水蒸氣蒸餾出揮發(fā)酚類(lèi)化合物，在鐵氰化鉀存在下，與4-氨基安替比林反應生成橙紅色的安替比林染料，用三氯甲烷萃取，在460nm 波長(cháng)測定吸光度定量。

3 試劑和材料

  除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規定的三級水。

3.1 試劑

3.1.1 三氯甲烷（CHCl3）。

3.1.2 氨水（NH3·H2O）。

3.1.3 硫酸（H2SO4）。

3.1.4 氫氧化鈉（NaOH）。

3.1.5 鐵氰化鉀（K3[Fe（CN）6]）。

3.1.6 硫酸銅（CuSO4·5H2O）。

3.1.7 甲基橙（C14H15N3NaO3S）。

3.1.8 氯化銨（NH4Cl）。

3.1.9 4-氨基安替比林（C11H13N3O）。

3.1.10 活性炭粉末（粒徑0.1mm~0.5mm）。

3.2 試劑配制

3.2.1 無(wú)酚水：取實(shí)驗用水，每升水中加入0.2g經(jīng)200℃烘干30min的活性炭粉末，充分振搖后，放置過(guò)夜，用雙層中速濾紙過(guò)濾后即可使用；或向實(shí)驗用水中加氫氧化鈉（NaOH）使水呈強堿性，并滴加高錳酸鉀溶液至紫紅色，移入全玻璃蒸餾器中加熱蒸餾，取餾出液備用。無(wú)酚水應貯于玻璃瓶中，取用時(shí)應避免與硅膠制品（橡皮塞或乳膠管等）接觸。

3.2.2 50%硫酸溶液：將濃硫酸在攪拌下緩緩加入等體積的實(shí)驗用水中。

3.2.3 10%氫氧化鈉溶液：稱(chēng)取10g氫氧化鈉溶于水中，稀釋至100mL，混勻。

3.2.4 8%鐵氰化鉀溶液：稱(chēng)取8g鐵氰化鉀（K3[Fe(CN)6]）溶于水中，稀釋至100mL，混勻，4℃冷藏，可使用一周。

3.2.5 10%硫酸銅溶液：稱(chēng)取10g硫酸銅（CuSO4·5H2O）溶于水中，稀釋至100mL，混勻。

3.2.6 0.05%甲基橙指示液：稱(chēng)取甲基橙0.05g溶于水中，稀釋至100mL，混勻。

3.2.7 緩沖溶液：稱(chēng)取20g氯化銨（NH4Cl）溶于100mL氨水（NH3·H2O）中，pH 約10.7，4℃冷藏。

3.2.8 2% 4-氨基安替比林溶液：稱(chēng)取2g 4-氨基安替比林（C11H13N3O）溶于水中，稀釋至100mL，4℃冷藏，可使用一周。

3.3 標準品

  苯酚標準品（C6H6O），純度≥99%。

3.4 標準溶液配制

3.4.1 標準儲備溶液：稱(chēng)取苯酚0.01g（精確至0.1mg）于50mL小燒杯中，加無(wú)酚水溶解，再轉移到100mL容量瓶中，定容，混勻，于4℃保存，苯酚質(zhì)量濃度為100μg/mL，有效期為7d。

3.4.2 標準工作液：取適量苯酚標準溶液，用無(wú)酚水稀釋至每毫升含1.00μg苯酚，配制后要在2h內使用。

4 儀器和設備

4.1 水蒸氣蒸餾儀或500mL玻璃水蒸氣蒸餾裝置（見(jiàn)附錄A）。

4.2 天平：感量為0.1mg和0.01g。

4.3 500mL（梨形）分液漏斗。

4.4 磁力攪拌器。

4.5 分光光度計。

4.6 調溫電爐或調溫電加熱套。

4.7 組織搗碎機。

5 分析步驟

5.1 試樣制備及保存

  水產(chǎn)品取可食部分用組織搗碎機勻漿后，攪拌均勻，分裝，密閉冷藏或冷凍保存。

5.2 試樣處理

5.2.1 蒸餾提取

  稱(chēng)取預處理的樣品10g~20g（精確到0.01g，同時(shí)做空白試驗）放燒杯中，加入氫氧化鈉溶液75mL，用磁力攪拌器攪拌10min。再加3~5滴甲基橙溶液，用硫酸溶液調節pH≤4（溶液呈橙紅色），再加硫酸銅溶液5mL，混勻后，置于水蒸氣蒸餾儀提取瓶或500mL蒸餾瓶中，用少量無(wú)酚水洗凈燒杯，洗滌液并入水蒸氣蒸餾儀提取瓶或蒸餾瓶中并加數粒玻璃珠。

  使用玻璃水蒸氣蒸餾裝置（或水蒸氣蒸餾儀）進(jìn)行蒸餾，應連接好水蒸氣蒸餾裝置，確保嚴密不漏氣，取250mL錐形瓶接收餾出液，中速蒸餾60min~90min，至餾出液約240mL時(shí)，停止蒸餾，并用10mL無(wú)酚水沖洗冷凝管，洗滌液并入餾出液中（蒸餾過(guò)程中保持酸性）。蒸餾液應盡量避免與橡膠制品接觸（橡皮塞、橡膠管和乳膠管里含有酚類(lèi)化合物添加劑），如需使用時(shí)用硅膠管（塞）代替。

5.2.2 顯色

  將餾出液移入分液漏斗中，加2.0mL緩沖溶液，混勻。加1.5mL4-氨基安替比林溶液，混勻，再加1.5mL鐵氰化鉀溶液，充分混勻后，放置10min。

5.2.3 萃取

  準確加入10.0mL三氯甲烷，密塞，劇烈振搖2min，靜置分層，徹底澄清透明后（不能存有氣泡），用干脫脂棉拭干分液漏斗頸管內壁，于頸管內塞入一小團干脫脂棉，將三氯甲烷通過(guò)干脫脂棉團，棄去最初濾出的數滴萃取液，直接放入光程為1cm 的比色皿中。安替比林染料用三氯甲烷萃取后，需6h以?xún)葴y定。

5.2.4 測定

  于460nm 波長(cháng)下，以空白三氯甲烷萃取液為參比，用分光光度計測量吸光度。

5.2.5 標準曲線(xiàn)繪制

  取8個(gè)分液漏斗，分別加入100 mL 水，依次加入0.0 mL、0.5 mL、1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、

7.0mL、10.0mL、15.0mL苯酚標準溶液，再分別加無(wú)酚水至250mL，顯色、萃取后，測定吸光度繪制標準曲線(xiàn)。

6 分析結果的表述

  試樣中揮發(fā)酚的含量按式（1）計算：

式中：

X ——試樣中揮發(fā)酚的含量（以苯酚計），單位為毫克每千克（mg/kg）；

m₁——由標準曲線(xiàn)求得試樣溶液中苯酚的量，單位為微克（μg）；

m₀——空白的苯酚量，單位為微克（μg）；

m ——試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術(shù)平均值表示，結果保留兩位有效數字。

7 精密度

  在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

8 檢出限

  本方法檢出限：0.05mg/kg。